茶多酚复合物抑癌及对细胞免疫功能的影响

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　　摘　要　为探明茶叶提取物——茶多酚复合物（TPP）抗肿瘤作用及其机理；采用脱咖啡碱的高纯度TPP进行动物体内外抑瘤作用和对细胞免疫功能影响的实验测定。结果表明：EAC或S180鼠分别ig40，80和120mg/（kg.d）的TPP，对EAC的抑制率分别为65.3%，51.0%和48.7%；对S180的抑制率为66.3%，68.5%和59.8%；EAC鼠的胸腺指数比对照组分别提高50.7%，40.6%和19.8%；脾指数提高34.4%，31.1%和20.0%；S180鼠的胸腺指数也分别提高了66.2%，47.2%和48.1%；脾指数也略有增高。离体细胞培养测定TPP对致敏T淋巴细胞的粘瘤和钻瘤活性，结果显示：各TPP组EAC鼠的胸腺或脾淋巴细胞对自体瘤细胞的ATI和ETI均明显高于对照组（P<0.01）。正常小鼠ig60mg/（kg.d）的TPP，连续给药12d后，腹腔M吞噬CRBC的百分率和吞噬指数比对照组分别增加69.6%和68.7%。因此认为TPP不仅具有明显抑制肿瘤的生长，而且还能增强和调节机体的非特异性免疫功能。

　　关键词　茶多酚；抑癌作用；免疫功能；钻瘤作用

Effect of Green Tea Polyphenols on Cellular

Immune Function and Their Antitumor Activity

Cao Mingfu, Shao Huiqin1

(Department of Biology, Hangzhou Teachers College, Hangzhou 310036；

1Institute for Drug Control of Zhejiang Province, Hangzhou 310004)

Abstract The dynamic changes of celluar immune function and anticancer effect of tea polyphenols (TPP) in the mice bearing EAC and S180 tumor were investigat ed. The results showed that at the doses of 40，80 and 120mg/kg.d-1 by ig admin istration for 10 days in the mice bearing tumor, the TPP can inhibit the EAC and S180 tumor growth, markedly increase their thymus and splenic lymphocytes adhe ring to tumor cell and emperipolesis index in vitro cultures (P<0.01). The experi mental results also indicated that the TPP could increase the phagocytosis of macrophage, at adose of 60mg/kg by igadministration for 12 days in no rmal mice. It suggested that anticarcinogenic mechanism of TPP possibly included both cellular immune function and inhibition of tumor growth.

Key Words　Tea polyphenols, Antitumor effect, Immunologic function , Emperipolesis

　　近年来，对茶叶及其提取物抗肿瘤作用的研究已取得了较大进展［1］，动物体内外实验结果均已证明：茶叶中含有抗肿瘤作用的活性成份。据报道茶叶及其提取物的抑癌作用除消除体内过量自由基，阻断致癌过程和直接杀死癌细胞外，还可能是通过增强机体免疫功能来抑制体内癌细胞的增长［2］。为进一步探明绿茶提取物中抗肿瘤作用的主要有效活性组分及其可能机制，本研究采用脱咖啡碱的高纯度绿茶多酚类化合物进行动物体内外的抑癌作用和对细胞免疫功能影响的实验测定。

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1　实验动物　NIH小白鼠由浙江省中医药研究院动物室提供，体重18±1g，雌雄兼用，鼠龄7～8wk。

1.1.2　茶多酚复合物（Tea Polyphenols, TPP）　由浙江农业大学茶学系采用专利工艺（CN1043730A）制备。为浅褐色粉末，多酚类化合物含量>95%，对小白鼠的LD50为2496±326mg/kg。

1.1.3　肿瘤模型　Ehrlich Ascitic Carinomai(EAC)和Sarcoma180（S180）均由浙江省医学科学院肿瘤研究室提供，按移植性实验肿瘤研究法给供试动物接种。

1.1.4　细胞培养液　在RPMI1640培养基中加入4mmol/LL-谷氨酰胺，25mmol/LHepes，5×10-5β-巯基乙醇，即为基础液；按Martin［2］方法制备条件液，在10%小牛血清中加20%条件液的基础液，即为工作培养液，内含conA5μg/ml。

1.1.5　5%鸡红细胞(CRBC)悬浮液　从公鸡静脉抽取血液，与Alsevers液混均匀，置冰箱中保存，临用前，用无菌生理盐水离心洗涤后，配制成5%的CRBC悬浮液。

1.1.6　试剂　阿氏液(Aleseverssol)，汉氏液(Hankssol),Giemsa-Wright染液，甲醇，台酚蓝，生理盐水等，按文献［5］制备。

1.2　方　法

1.2.1　动物体内抑瘤试验　按移植性肿瘤实验方法给小鼠接种肿瘤，24h后称体重，随机分成四组，每组12只小鼠，分设1个对照组和3个TPP给药组，给药Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ组分别ig40，80和120mg/(kg.d)剂量的TPP，对照组ig等体积的生理盐水，连续给药10d，停药24h后，解剖出肿瘤组织，称瘤重；测定每克瘤的细胞数，然后算出各TPP给药组的抑瘤率。

1.2.2　免疫器官重量及细胞数的测定　荷瘤小鼠给药方式和剂量同“抑瘤试验”，停药24h后，称体重，在测抑瘤作用的同时，解剖出瘤鼠胸腺和脾脏，称湿重。按文献［5］的方法，计算胸腺指数、脾指数，并测出每克免疫器官的细胞数。

1.2.3　致敏T淋巴细胞钻瘤作用的测定　小鼠移植腹水型肿瘤EAC24h后，随机分成四组，每组5只小鼠，即1个对照组和3个TPP给药组，给药Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ组分别ig40，80和120mg/(kg.d)剂量的TPP，对照组ig生理盐水，给药10d后，在无菌操作下，解剖出荷瘤鼠的胸腺、脾脏和EAC，用工作培养液分别制成细胞悬浮液，预培养4h，除去巨噬细胞，调细胞浓度为5×106细胞/ml（免疫细胞）和5×105细胞/ml(EAC)。将胸腺或脾淋巴细胞分别与EAC等体积混合，分装于培养瓶内（2ml/瓶），置37℃下边培养边观察，每隔1h计数200个以上的瘤细胞和淋巴细胞粘着及钻入瘤细胞数，按下列公式计算出粘瘤指数(Adhension Tumor Cell Index，简称ATI)和钻瘤指数(Emperipolesis Tumor Cell Index，简称ETI)。

粘(钻)瘤指数(%)=

　　

1.2.4　腹腔巨噬细胞(M)吞噬功能的测定　将小鼠随机分2组，每组5只，即1个对照组和1个TPP给药组，给药组ig60mg/(kg.d)的TPP，对照组ig生理盐水，连续给药12d，在收集小鼠腹腔M前12h，ip5%CRBC0.2ml/只，处死小鼠前ip2.5ml/只汉氏液，然后处死小鼠吸取腹腔细胞液，置于载玻片上，置37℃孵育3min，用生理盐水冲洗载片，干燥后用甲醇固定，Giemsa-Wright液染色，玻片标本干燥后，镜检，计数M总数和其中吞噬CRBC的M数，并按下列公式计算巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数：

　　吞噬百分率=吞噬CRBC的M数/100个M数

　　吞噬指数=100个M所吞噬CRBC的总数/100

2　结果与分析

2.1　TPP的抑瘤作用

　　EAC鼠或S180鼠，连续igTPP10d后，对腹水型肿瘤EAC和实体型肿瘤S180均具有明显的抑制作用（如表1），在3个剂量的TPP组中的瘤重比对照组（CK）明显降低（P<0.01），其中对EAC的抑制率以40mg/(kg.d)的剂量组最为明显，而对S180的抑制作用以80mg/(kg.d)TPP剂量组为最佳。重复实验也说明，TPP对不同类型的肿瘤的抑制作用的最适剂量是有差异的。

Tab 1　The inhibition effect of TPP on growth of tumor in mice

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