6-BA对油茶离体叶片衰老的延缓作用

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摘要 在照光和黑暗条件下研究了不同浓度的6-BA和GA+6-BA混合剂处理对油茶离体叶片衰老的影响，结果表明，在光条件下6-BA可以保持叶片细胞的超氧歧化酶(SOD)活性(为对照的129%)，降低了膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)的积累(为对照的47%)，延缓叶绿素和蛋白质的降解，说明6-BA有延缓叶片衰老的作用，在黑暗条件下上述生理指标的水平较低，表明光对6-BA的作用有一定的增益效应，GA+6-BA混合剂处理没有明显效果。

关键词 6-苄氨基嘌呤；油茶叶片；延缓衰老

中图分类号 S794.401

促进油茶产量提高是林业工作者的紧迫任务，除了采取集约经营的一系列措施外，还必须努力探索其生长发育的内在生理生化机制.油茶叶片是积累干物质的源泉，如果能延缓叶片的衰老将会有效地增加产量.衰老被认为是一种氧化过程，是功能的衰退，是体内自由基累积导致膜脂脂质过氧化的结果〔1〕.离体叶片衰老容易调控，试验周期短.因此采取6-BA、GA等处理油茶离体叶片，然后测定与叶片衰老相关的超氧歧化酶(SOD)活性，过氧化作用产物丙二醛(MDA)含量、叶绿素和蛋白质含量等生理指标.为延缓油茶生长后期叶片衰老过程达到增产目的提供理论依据。1 材料与方法

1.1材料的处理

取枝梢下部2～3片成熟叶片为材料，钻取面积约为1.2cm2圆片，分别漂浮于1mg/L6-BA、5mg/L6-BA 溶液、6-BA+GA 混合液(各为2.5mg/L)和水中.每个处理取70～80个小圆片，各项处理分别光和暗两种条件下进行，室温25℃～27℃放置8天，每种处理重复3次。

1.2生理生化指标测定

1.2.1叶绿素含量测定　按Arnnan的方法取处理的圆叶片用95%乙醇研磨提取，滤液用721分光光度计测定光密度值，计算含量〔2〕。

1.2.2蛋白质含量测定　取处理的圆叶片加0.2mol／L磷酸缓冲液(pH6.0)研磨匀浆，离心取上清液加入考马斯亮兰溶液于721分光光度计595nm波长处测光密度值，计算含量〔3〕。

1.2.3SOD活性测定

将处理的圆叶片冲洗干净吸干后于4℃下加入0.05mol／L磷酸缓冲液(pH7.8)研磨匀浆，10000r／min离心20min，上清液用721分光光度计测定光密度值，计算酶活性，以抑制氮兰四唑光化还原50%为一个酶单位〔4〕。

1.2.4MDA含量测定　取处理的圆叶加蒸馏水研磨匀浆，在提取液中加入0.5%硫代巴比妥酸溶液沸水浴中煮沸10min，3000r／min 离心15min，取上清液测532nm和600nm处的光密度，计算过氧化脂质含量〔5〕。

1、2、3、4—光处理 1′、2′、3′、4′—暗处理

1，1′—对照2，2′—5mg／L6-BA 3，3′—1mg／L6-BA

4，4′—6-BA+GA(各2.5mg／L)

附图 不同浓度6-BA处理对油茶叶片各生理指标的影响2 试验结果

2.1 6-BA对油茶叶片叶绿素含量的影响

光照条件下5mg／L和1mg／L6-BA处理的油茶叶片的叶绿素含量分别为对照的115%和133%(经方差分析呈显著差异)，暗条件下上述两种浓度的6-BA处理的叶片叶绿素含量分别为对照的106%和114%(附图)，说明6-BA处理能维持较高的叶绿素含量，5mg／L6-BA处理的效果更佳，而且光照条件下有增益效应。

2.2 6-BA对油茶叶片蛋白质含量的影响

经过6-BA处理的油茶叶片蛋白质含量比对照的增加较多(附图)，光照条件下以5mg／L和1mg／L6-BA处理的叶片蛋白质含量分别相当于对照的154%和120%，暗条件下上述两种浓度的6-BA处理的叶片蛋白质含量分别相当于对照的139%和118%，说明6-BA能有效地延缓叶片中蛋白质的降解从而延缓叶片衰老，也可以看出GA+6-BA混合液处理的叶片蛋白质含量与对照的无显著差异。

2.3 6-BA对油茶叶片SOD活性的影响

光照条件下以5mg／L和1mg／L6-BA处理的叶片SOD活性分别比对照的高29%和20%，暗条件下经上述两种浓度6-BA处理的叶片SOD活性分别比对照的高18%和13%，说明6-BA能维持叶片SOD活性较高水平，有效地防止叶片衰老.GA+6-BA混合液处理的叶片SOD活性与对照的也无明显差异(附图)。

2.4 6-BA对油茶叶片MDA含量的影响

光照条件下经5mg／L和1mg／L6-BA处理的叶片MDA含量分别比对照的低27%和14%，暗条件下经上述两种浓度6-BA处理的叶片MDA含量分别比对照的低的22%和11%，说明6-BA能抑制油茶叶片的膜脂过氧化作用。GA+6-BA混合液处理的叶片MDA含量与对照的也无明显差异(附图)。3 结论与讨论

油茶叶片的光合色素、可溶性蛋白质含量、可以清除活性氧危害的SOD活性的降低和由于膜脂过氧化作用加强MDA含量增加而导致叶片衰老。以6-BA处理叶片可以明显影响这些生理过程。MDA的积累比对照少，SOD活性维持在较高水平，明显加强了细胞内清除自由基的能力，抑制膜脂的过氧化作用。Dhindsa等也发现激动素对燕麦叶片片段有防止MDA增加的作用〔6〕。可见细胞分裂素是通过影响蛋白质、类脂、色素等一系列代谢过程延缓叶片衰老的，以6-BA+GA混合液处理叶片对其生理过程无明显影响。

本试验结果，6-BA溶液的光照条件下处理叶片比暗条件下处理具有比较显著的效果，说明光对激素的作用有增益效应，表明以6-BA和GA等调节叶片衰老过程的效果可能因外界条件的差异而有所不同。

加入外源细胞分裂素可以延缓油茶叶片的衰老，延长光合器官的功能增加干物质，因此在林业生产实践上也具有参考价值。

参考文献

1 林植芳等.水稻叶片的衰老；超氧物歧化酶及膜脂过氧化的变化.植物学报，1984，26(6)：605～615

2 华东师范大学生物系植物生理教研室主编.植物生理学实验指导.北京：人民教育出版社，1980.68～166

3 李琳等.应用蛋白染色剂考马斯兰G—250测定蛋白质的方法.植物生理学通讯，1980，(6)：52～55

4 黄学林等编.种子生理实验手册.北京：农业出版社，1990.127～130

5 朱广廉等编.植物生理学实验.北京：北京大学出版社1990.245～248

6 Dhindsa R S，Plumb-Dhindsa P L and D M Reis.Leaf senescence and lipid peroxidation:Effect of some phytohormones and scarengers of free redicals and singler oxygen.Plant Physiol，1982，56:453～457

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