茶 游离氨基酸总量测定

本标准适用于茶叶中游离氨基酸总量的测定。茶叶水浸出物中具有α-氨基的有机酸且呈游离状态存在者，均称茶叶游离氨基酸。1、原理氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定的波长下测定其含量。2、仪器和用具实验室常规仪器及下列各项:2.1 分析天平: 感量0.0001g。2.2 分光光度仪。3、试剂和溶液3.1 pH8.0磷酸盐缓冲液:按GB 8313—87《茶 茶多酚测定》中3.2的规定，配制1/15M磷酸氢二钠(3.2.1)和1/15M磷酸二氢钾(3.2.2)溶液。然后取1/15M的磷酸氢二钠溶液95mL和1/15M磷酸二氢钾溶液5mL，混匀。3.2 2％茚三酮溶液: 称取水合茚三酮(纯度不低于99％)2g，加50mL水和80mg氯化亚锡(GB638—78，分析纯)，搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100mL。3.3 茶氨酸或谷氨酸标准液: 称取100mg茶氨酸或谷氨酸(纯度不低于99％)溶于100mL水中，作为母液。准确吸取5mL母液，加水定容至50mL作为工作液(1mL含茶氨酸或谷氨酸0.1mg)。4、操作方法4.1 取样按GB 8302—87《茶 取样》规定取样。4.2 试样的制备按GB 8303—87《茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定》的规定，制备试样。4.3 测定步骤4.3.1 试液的制备按GB 8305—87《茶 水浸出物测定》中3.4.1的规定，制备试液。4.3.2 测定准确吸取试液(4.3.1)1mL,注入25mL容量瓶中，加0.5mLpH8.0缓冲液(3.1)和0.5mL2％茚三酮溶液(3.2)，在沸水浴中加热15min。待冷却后加水定容至25mL。放置10min后，用5mm比色杯，在570nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)。4.3.3 氨基酸定量标准曲线的制作分别吸取0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL氨基酸工作液(3.3)于一组25mL容量瓶中，各加水4mL、茚三酮溶液(3.2) 0.5mL和缓冲液(3.1) 2mL，在沸水浴中加热15min，冷却后加水定容至25mL，按4.3.2的操作测定吸光度(A)。将测得的吸光度与对应的茶氨酸或谷氨酸浓度绘制标准曲线。注: 制作标准曲线时，所用蒸馏水，必须是二次蒸馏水。5、结果计算5.1 计算方法和公式茶叶中游离氨基酸含量，以干态质量百分率表示，按下式计算:C L1──×──1000 L2游离氨基酸总量(％)＝ ───── ×100M×m式中: L1——试液总量,mL;L2——测定用试样量,mL;M——试样量,g;C——根据4.3.2测定的吸光度从标准曲线上查得的茶氨酸的mg数;m——试样干物质含量百分率，％。如果符合重复性(5.2)的要求，取两次测定的算术平均值作为结果。5.2 重复性同一样品进行两次测定，测定值之差，每100g试样不得超过0.1g。6、结果报告试验报告应包括下列内容:a. 使用的方法;b. 测定的结果(取小数点后一位);c. 本标准中末规定的或另加的操作;d. 试样的名称和产地;e. 试验日期，操作人员。