茶游离氨基酸总量测定
1 范围
本标准规定了对茶叶中游离氨基酸总量测定的原理、仪器和用具、试剂和溶液、操作方法及结果计算方法。
本标准适用于茶叶中游离氨基酸总量的测定。
2 引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T 8302—2002 茶 取样
GB/T 8303—2002 茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定
GB/T 8312—2002 茶 咖啡碱测定
3 定义
本标准采用下列定义。
游离氨基酸 free amino acids
茶叶水浸出物中呈游离状态存在的具有α-氨基的有机酸。
4 原理
α-氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定的波长下测定其含量。
5 仪器和用具
实验室常规仪器及下列各项：
5.1 分析天平：感量0.001g。
5.2 分光光度仪。
6 试剂和溶液
所用试剂应为分析纯(AR)，水为蒸馏水。
6.1 pH8.0磷酸盐缓冲液：按GB/T 8313—2002中6.2的规定，配制1/15mol/L磷酸氢二钠(6.2.1)和1/15mol/L磷酸二氢钾(6.2.2)溶液。然后取1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液95mL和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液5mL，混匀。
6.2 2%茚三酮溶液：称取水合茚三酮(纯度不低于99%)2g，加50mL水和80mg氯化亚锡(SnCl22H2O)搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100mL。
6.3 茶氨酸或谷氨酸标准液：称取100mg茶氨酸或谷氨酸(纯度不低于99%)溶于100mL水中，作为母液。准确吸取5mL母液，加水定容至50mL作为工作液(1mL含茶氨酸或谷氨酸0.1mg)。
7 操作方法
7.1 取样
按GB/T 8302的规定。
7.2 试样制备
按照GB/T 8303的规定。
7.3 测定步骤
7.3.1 试液的制备
按GB/T 8312—2002中11.1的规定。
7.3.2 测定
准确吸取试液(7.3.1)1mL，注入25mL的容量瓶中，加0.5mL pH8.0磷酸盐缓冲液(6.1)和0.5mL 2%茚三酮溶液(6.2)，在沸水浴中加热15min。待冷却后加水定容至25mL。放置10min后，用5mm比色杯，在570nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)。
7.3.3 氨基酸标准曲线的制作
分别吸取0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL氨基酸工作液(6.3)于一组25mL容量瓶中，各加水4mL、pH 8.0磷酸盐缓冲液(6.1)0.5mL和2%茚三酮溶液(6.2)0.5mL，在沸水浴中加热15min，冷却后加水定容至25mL，按7.3.2的操作测定吸光度(A)。将测得的吸光度与对应的茶氨酸或谷氨酸浓度绘制标准曲线。
8 结果计算
8.1 计算方法
茶叶中游离氨基酸含量以干态质量分数表示，按式(1)计算：
8.2 重复性
同一样品的两次测定值之差，每100g试样不得超过0.1g。
